Идентификация, сортировка и профилирование функциональных клеток-киллеров посредством захвата флуоресцентной мишени.

Природная биомедицинская инженерия (2023 г.) Процитировать эту статью

10 Альтметрика

Подробности о метриках

Анализы для оценки клеточно-опосредованной цитотоксичности в основном ориентированы на клетки-мишени и не могут идентифицировать и изолировать субпопуляции цитотоксических эффекторных клеток. Здесь мы описываем анализ, совместимый с проточной цитометрией для точной идентификации и сортировки субпопуляций функциональных клеток-киллеров в совместных культурах. Анализ, который мы назвали PAINTKiller (что означает «идентификация клеток-киллеров при бесконтактном аффинном внутриклеточном переносе»), основан на обнаружении внутриклеточного флуоресцентного белка, «окрашенного» лизированной клеткой на поверхности лизирующей цитотоксической клетки (в частности, на клеточной поверхности). В ходе лизиса внутриклеточное производное флуоресцеина карбоксифлуоресцеин сукцинимидиловый эфир захватывается на поверхности естественных клеток-киллеров антителом к ​​изотиоцианату антифлуоресцеина, связанным с антителом к ​​панлейкоцитарному поверхностному рецептору CD45). Этот анализ можно интегрировать с секвенированием одноклеточной РНК для анализа молекулярных путей, связанных с клеточной цитотоксичностью, и использовать для выявления коррелятов функциональных иммунных ответов.

Это предварительный просмотр контента подписки, доступ через ваше учреждение.

Доступ к журналу Nature и 54 другим журналам Nature Portfolio.

Приобретите Nature+, нашу выгодную подписку с онлайн-доступом.

29,99 долларов США / 30 дней

отменить в любое время

Подпишитесь на этот журнал

Получите 12 цифровых выпусков и онлайн-доступ к статьям.

99,00 долларов США в год

всего $8,25 за выпуск

Возьмите напрокат или купите эту статью

Цены варьируются в зависимости от типа статьи

от$1,95

до$39,95

Цены могут зависеть от местных налогов, которые рассчитываются во время оформления заказа.

Кураторские наборы генов-признаков общедоступны в базе данных молекулярных сигнатур (MSigDB, v.7.4). Данные секвенирования PAINTKiller-seq доступны в базе данных GEO под номером доступа GSE207508. Все данные, необходимые для оценки выводов, описанных в этом документе, включены в сам документ и дополнительную информацию к нему. Необработанные и проанализированные наборы данных, полученные в ходе исследования, доступны для исследовательских целей у соответствующих авторов по обоснованному запросу. Исходные данные приведены в статье.

Код R для воспроизведения анализа, показанного на рисунках, доступен на Zenodo по адресу https://doi.org/10.5281/zenodo.8004120.

Каги Д., Ледерманн Б., Бурки К., Зинкернагель Р.М. и Хенгартнер Х. Молекулярные механизмы опосредованной лимфоцитами цитотоксичности и их роль в иммунологической защите и патогенезе in vivo. Анну. Преподобный Иммунол. 14, 207–232 (1996).

Статья CAS PubMed Google Scholar

Прагер И. и Ватцл К. Механизмы клеточной цитотоксичности, опосредованной естественными киллерами. Дж. Леукок. Биол. 105, 1319–1329 (2019).

Статья CAS PubMed Google Scholar

Бруннер К.Т., Мауэль Дж., Чероттини Дж.К. и Шапюи Б. Количественный анализ литического действия иммунных лимфоидных клеток на меченные 51Cr аллогенные клетки-мишени in vitro; ингибирование изоантителами и лекарственными средствами. Иммунология 14, 181–196 (1968).

CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Сепп А., Биннс Р.М. и Лехлер Р.И. Улучшенный протокол колориметрического обнаружения цитотоксичности, опосредованной комплементом, на основе измерения активности цитоплазматической лактатдегидрогеназы. Дж. Иммунол. Методы 196, 175–180 (1996).

Статья CAS PubMed Google Scholar

Вонг П., Вагнер Дж. А., Берриен-Эллиотт М. М., Шаппе Т. и Фенигер Т. А. Анализ цитотоксичности мышиных NK-клеток на основе проточной цитометрии ex vivo. ЗВЕЗДНЫЙ протокол. 2, 100262 (2021).

Статья CAS PubMed PubMed Central Google Scholar